Hot Start PCR Master Mixy

Úvod

Tyto Master Mixy se vyznačují tím, že obsahují navíc monoklonální protilátku anti-Taq, která se váže na DNA polymerázu a tím blokuje její enzymatickoyu aktivitu. Při prvním denaturačním cyklu PCR dochází k denaturaci protilátky a ztrátě její vazebné aktivity. Tím dochází k obnovení enzymatické aktivity DNA polymerázy. Tento proces, který zvyšuje specificitu PCR se označuje Hot Start PCR.

Hot Start PCR Master Mixy Top-Bio provenience

V současné době jsou k dispozici následující typy 2x koncentrovaných PCR Master Mixů, které se liší svým složením a využitelností:

Aptamer Hot Start Master Mix

• Obsahuje anti-Taq DNA aptamer, který reverzibilně váže Taq DNA polymerázu a tím inhibuje její enzymatickou aktivitu při teplotě nižší než 45°C. V průběhu PCR se aptamer uvolní a dochází k obnově aktivity enzymu. Tyto vlastnosti aptameru usnadňují přípravu reakční směsi pro PCR za pokojové teploty. Hot start PCR s využitím aptameru nevyžaduje prodlouženou inkubaci za denaturační teploty. Po skončení PCR se aptamer při nižší teplotě opět naváže na Taq DNA polymerázu a tím zablokuje její enzymatickou aktivitu.

Combi PPP Master Mix

• Modifikace PPP Master Mixu, obsahuje navíc anti-Taq protilátku.

Plain Combi PP Master Mix

• Modifikace Combi PPP Master Mixu, avšak neobsahuje barvivo.

LA Hot Start Master Mix

• Obsahuje unikátní směs dvou DNA polymeráz. Jednou z nich je Taq DNA polymeráza, která je vysoce procesivní, ale postrádá 3´→5´ exonukleázovou aktivitu a není schopna opravovat chyby v podobě nukleotidových záměn při syntéze komplementárního řetězce DNA. Druhá polymeráza je méně procesivní, ale vykazuje 3´→5´ exonukleázovou aktivitu a tím snižuje množství chyb vzniklých při replikaci DNA. Kombinace těchto dvou polymeráz vede k výraznému snížení chyb při zachování vysoké robustnosti (LA = long and accurate PCR) . To umožňuje amplifikaci úseků DNA do velikosti 15 kb (v případě komplexní genomové DNA) nebo až 40 kb (v případě virové DNA) s podstatně nižším výskytem mutací ve srovnání se samotnou Taq DNA polymerázou.