LA DNA Polymerases Mix
LA DNA Polymerases Mix představuje unikátní směs dvou DNA polymeráz. Jednou z nich je Taq DNA polymeráza, která je vysoce procesivní, ale postrádá 3´→5´ exonukleázovou aktivitu a tedy není schopna opravovat chyby v podobě nukleotidových záměn při syntéze komplementárního řetězce DNA. Druhá polymeráza je sice méně rychlá v syntéze nukleotidů, ale má schopnost 3´→5´ exonukleázové aktivity a výrazně tak snižuje množství chyb vzniklých při replikaci DNA.
| Kat. č. | Název | Balení | Cena | |
|---|---|---|---|---|
| L072 | LA DNA Polymerases Mix | 500 U | 3 069,00 Kč | |
| L073 | LA DNA Polymerases Mix | 5x 500 U | 12 276,00 Kč | |
| L074 | LA DNA Polymerases Mix | 10x 500 U | 21 483,00 Kč | |
| L074a | LA DNA Polymerases Mix + PCR dNTP mix | 10x 500 U + 10x 100 µl | 24 486,00 Kč | |
| L072a | LA DNA Polymerases Mix + PCR dNTP mix | 500 U + 100 µl | 3 498,00 Kč | |
| L073a | LA DNA Polymerases Mix + PCR dNTP mix | 5x 500 U + 5x 100 µl | 13 992,00 Kč | |
| L076 | 10x konc. LA PCR pufr bez MgCl2+MgCl2 | 1,5 ml + 0,5 ml | 79,00 Kč | |
| L077 | DMSO | 1 ml | 89,00 Kč |
Popis produktu
LA DNA Polymerases Mix představuje unikátní směs dvou DNA polymeráz. Jednou z nich je Taq DNA polymeráza, která je vysoce procesivní, ale postrádá 3´→5´ exonukleázovou aktivitu a tedy není schopna opravovat chyby v podobě nukleotidových záměn při syntéze komplementárního řetězce DNA. Druhá polymeráza je sice méně rychlá v syntéze nukleotidů, ale má schopnost 3´→5´ exonukleázové aktivity a výrazně tak snižuje množství chyb vzniklých při replikaci DNA.
Kombinace těchto dvou polymeráz vede k výraznému snížení chyb při syntéze komplementárního vlákna DNA při zachování vysoké rychlosti syntézy. To umožňuje amplifikaci fragmentů DNA do velikosti 10-20 kb (v případě komplexní genomové DNA) nebo 40 kb (v případě virové DNA) s přibližně 5x nížším výskytem mutací ve srovnání se samotnou Taq DNA polymerázou. Jedná se tedy o „Long and Accurate“ (LA) PCR. LA DNA Polymerases Mix je především vhodný pro amplifikaci DNA nebo cDNA fragmentů určených pro klonace.
Technické údaje
Komponenty a balení
-
LA DNA Polymerases Mix je dodáván v koncentraci 5 U/µl. V základním balení jsou: 1 zkumavka po 500 U/100 µl (L072), 5 zkumavek po 500 U/100 µl (L073) nebo 10 zkumavek po 500 U/100 µl (L074).
-
Ke každé zkumavce s LA DNA polymerases Mix je přidána 1 zkumavka s 10x LA PCR reakčním pufrem (1,5 ml). Rovněž je možné objednat 10x LA PCR reakční pufr bez MgCl2, ke kterému je dodáván 25 mM MgCl2 v samostatné zkumace (L076).
-
Ke každé zkumavce s LA DNA polymerases Mix je přidána 1 zkumavka s DMSO (1 ml).
Skladování
-
Skladovat při teplotě -20°C ± 5°C. Krátkodobě (dny) lze skladovat/přepravovat při teplotě až do 30oC.
Složení
-
Skladovací pufr pro LA DNA Polymerases Mix: 20 mM Tris-HCl, pH 8,0 (25°C), 100 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,5% Nonidet P-40, 0,5% Tween 20, 50% glycerol.
-
10x LA PCR reakční pufr: 500 mM Tris-HCl, pH 9,3 (25°C), 150 mM (NH4)2SO4, 1% Tween 20, 22,5 mM MgCl2.
Aktivita
-
Jedna jednotka aktivity (U) je definována jako množství enzymu, které katalyzuje zabudování 10 nmol dNTP během 30 min při 72°C do materiálu precipitovatelného trichloroctovou kyselinou. Reakce probíhá v objemu 50 µl v pufru obsahujícím 10 mM Tris-HCl (pH 8,8 při 25°C), 50 mM KCl, 0,1% Triton X-100, 1,5 mM MgCl2, 200 µM dATP, dCTP, dGTP a [α-32P]dTTP, 50 µg/ml denaturované DNA, 0,5 µM primer a 0,2 - 0,5 U enzymu.
Kontrola kvality
-
Čistota polymeráz je ověřována metodou SDS-PAGE. Preparát neobsahuje nukleázy.
-
Každá výrobní šarže LA DNA Polymerases Mix je testována na schopnost amplifikovat fragment genu savčí genomové DNA pomocí PCR. Výsledný produkt je analyzován elektroforézou na agarosovém gelu v přítomnosti ethidium bromidu; pouze očekávaný fragment DNA je produkován.