Q-Taq DNA polymeráza
Jedná se o rekombinantní DNA polymerázu, izolovanou nově vyvinutou metodou snižující množství kontaminující DNA. V komerčně dostupných preparátech DNA polymeráz je přítomno 10 - 1000 genomových ekvivalentů bakteriální dsDNA na jednotku enzymu (Spangler et al., Plos One, 4: e7010, 2009). Bakteriální DNA, kontaminující preparáty DNA polymeráz, může způsobovat problémy při některých typech DNA amplifikací, zvláště bakteriálních genotypizací pomocí PCR. Q-Taq DNA polymeráza má významným způsobem sníženou kontaminující dsDNA (viz Tabulka 1) a zvyšuje kvalitu PCR s některými typy primerů (viz Obrázek 1).
| Kat. č. | Název | Balení | Cena | |
|---|---|---|---|---|
| Q040 | Q-Taq DNA polymeráza | 500 U | 3 069,00 Kč | |
| Q041 | Q-Taq DNA polymeráza | 5x 500 U | 12 276,00 Kč | |
| Q042 | Q-Taq DNA polymeráza | 10x 500 U | 21 483,00 Kč |
Popis produktu
Jedná se o rekombinantní DNA polymerázu, izolovanou nově vyvinutou metodou snižující množství kontaminující DNA. V komerčně dostupných preparátech DNA polymeráz je přítomno 10 - 1000 genomových ekvivalentů bakteriální dsDNA na jednotku enzymu (Spangler et al., Plos One, 4: e7010, 2009). Bakteriální DNA, kontaminující preparáty DNA polymeráz, může způsobovat problémy při některých typech DNA amplifikací, zvláště bakteriálních genotypizací pomocí PCR. Q-Taq DNA polymeráza má významným způsobem sníženou kontaminující dsDNA (viz Tabulka 1) a zvyšuje kvalitu PCR s některými typy primerů (viz Obrázek 1).
Tabulka 1. Analýza přítomnosti dsDNA v preparátech komerčně dostupných teplotně rezistentních polymeráz různých výrobců. Výsledky ukazují, že Q-Taq má podstatně sníženou (nedetekovatelnou) hladinu kontaminující dsDNA.
| Enzym | Kat.č. | Výrobce | Koncentrace DNA* |
| Taq polymerase (DNA free, HPLC-pure) | Ultrapure grade | Gene and Cell Technologies, USA | 43,5 ± 2,6 |
| High-Fidelity DNA polymerase | 172-5301 | Bio-Rad Laboratories | 20,9 ± 1,3 |
| Q-Taq DNA polymeráza | Q040 | Top-Bio, s.r.o. | < 0,5 |
*(ng/ml; průměr ± S.D.) Koncentrace DNA byla určena fluorescenční metodou s využitím Qubit dsDNA HS Assay kit (ThermoFisher Scientific, kat. č. Q32851) a kvantifikována pomocí Qubit 3.0 fluorometru (ThermoFisher Scientific; kat. č. Q33216). Průměry ± S.D. byly vypočteny z 3-4 nezávislých měření.
Technické údaje
Komponenty a balení
-
Q-Taq DNA polymeráza je dodávána v koncentraci 5 U/µl. V základním balení jsou: 1 zkumavka s 500 U/100 µl (Q040), 5 zkumavek po 500 U/100 µl (Q041) nebo 10 zkumavek po 500 U/100 µl (Q042).
-
Ke každé zkumavce s Q-Taq DNA polymerázou je přidána 1 zkumavka s 10x PCR Blue Bufferem (1,5 ml). Rovněž je možné objednat 10x PCR Blue Buffer bez MgCl2, ke kterému je dodáván 25 mM MgCl2 v samostatné zkumavce (T059).
Skladování
-
Skladovat při teplotě -20°C ± 5°C. Krátkodobě (dny) lze skladovat/přepravovat při teplotě až do 30oC.
Složení
- Skladovací pufr pro Q-Taq DNA polymerázu: 20 mM Tris-HCl (pH 8,0 při 25°C), 100 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,5% Nonidet P-40, 0,5% Tween 20, 50% glycerol.
- 10x PCR Blue Buffer: 750 mM Tris-HCl (pH 8,8 při 25°C), 200 mM (NH4)2SO4, 1% Tween 20, 25 mM MgCl2.
Aktivita
-
Jedna jednotka aktivity (U) je definována jako množství enzymu, které katalyzuje zabudování 10 nmol dNTP během 30 min při 72°C do materiálu precipitovatelného trichloroctovou kyselinou. Reakce probíhá v objemu 50 µl v pufru obsahujícím 10 mM Tris-HCl (pH 8,8 při 25°C), 50 mM KCl, 0,1% Triton X-100, 1,5 mM MgCl2, 200 µM dATP, dCTP, dGTP a [α-32P]dTTP, 50 µg/ml denaturované DNA, 0,5 µM primer a 0,2 - 0,5 U enzymu.
Kontrola kvality
-
Čistota Q-Taq DNA polymerázy je ověřována metodou SDS PAGE. Enzym migruje jako jediný proužek o molekulové hmotnosti 94 kD. Preparát neobsahuje nukleázy.
-
Každá výrobní šarže Q-Taq DNA polymerázy je testována na schopnost amplifikovat fragment genu savčí genomové DNA pomocí PCR. Výsledný produkt je analyzován elektroforézou na agarózovém gelu v přítomnosti ethidium bromidu; pouze očekávaný fragment DNA je produkován.