qPCR 2x SYBR Master Mix_BLUE

Popis produktu

Popis produktu

qPCR 2x SYBR Master Mix je určený pro analýzu vzorků pomocí metody qPCR s kvantifikací amplifikovaných DNA fragmentů pomocí fluorescenčního DNA barviva SYBR Green I. Tento Master mix obsahuje navíc modré barvivo, které umožňuje snadnější sledování přítomnosti Master Mixu v jamkách destiček a přitom nemá vliv na qPCR.

SYBR Green I

• Produkt obsahuje interkalační DNA barvivo SYBR Green I, které se po navázání na dvouvláknovou DNA stává silně fluorescenční s maximální excitací 497 nm (modré světlo) a emisí 520 nm (zelené světlo). Protože fluorescence SYBR Green I nenavázaného na DNA je velmi nízká, je nárůst fluorescence vzorku na konci elongační fáze PCR cyklu přímo úměrný množství amplifikovaných fragmentů.

Vizualizační modré barvivo

• Produkt obsahuje barvivo qPCR Visible Blue Mark firmy Top-Bio (Kat. č. B129), které zvyšuje vizibilitu přítomnost Master mixu v reakčních jamkách; tím usnadňuje pipetování a sledování distribuce reakčních směsí v jamkách destiček.

Hot Start

• Produkt obsahuje monoklonální protilátku anti-Taq, která se váže na Taq DNA polymerázu a tím blokuje její enzymatickou aktivitu a zamezuje amplifikaci nespecifických DNA fragmentů. Protilátka je teplotně inaktivována při prvním denaturačním cyklu qPCR.

Rychlá příprava (2x koncentrovaný)

• Produkt obsahuje všechny konstantní komponenty pro qPCR 2x koncentrované (optimalizovaný reakční pufr, nukleotidy, Taq DNA polymerázu, protilátku anti-Taq, SYBR Green I a barvivo qPCR Visible Blue Mark). To umožňuje rychlou přípravu reakční směsi bez nutnosti rozmrazování a přesného dávkování jednotlivých komponent. Stačí dodat primery, templátovou DNA a eventuálně doplnit H₂O (součást balení).

Citlivá detekce

• Tento produkt je optimalizován pro citlivou a přesnou detekci DNA fragmentů amplifikovaných při qPCR z genomové DNA nebo z cDNA, získané metodou reverzní transkripce.

Obr. 1. qPCR Visible Blue Mark usnadňuje pipetování do multi-jamkových destiček. Do jamek 384-jamkové destičky byly vpraveny 10 µl alikvoty qPCR 2x  SYBR Master Mix (sloupce 3-8) nebo 10 µl alikvoty qPCR 2x SYBR Master Mix_BLUE, obsahující 100x ředěný qPCR Visible Blue Mark (sloupce 1, 2, 9-14, 23, 24). We sloupci 16-22 byl qPCR 2x SYBR Master Mix_BLUE napipetován jen do řádek A, C, E, G, I, K, M a O. Ve sloupci 15 zůstaly všechny jamky prázdné.

 Obr. 2. qPCR Visible Blue Mark neovlivňuje účinnost qPCR. qPCR 2x SYBR Master Mix (Top-Bio, kat. č. P551) byl doplněn (modré křivky) nebo ne (zelené křivky) o qPCR Visible Blue Mark (konečné ředění 1:200), DNA templát v pěti desetinásobných ředěních a odpovídající primery. Do testu byla také zahrnuta kontrola bez DNA templátu (NTC). Vzorky ve trojicích byly analyzovány pomocí cykleru pro real-time PCR.

Technické údaje

Komponenty balení

• 1 zkumavka s 0,5 ml qPCR 2x SYBR Master Mixu_BLUE (na 40 reakcí po 25 µl).
• 1 zkumavka 1,5 ml PCR Ultra H₂O.

Skladování

• Skladovat při teplotě -20°C ± 5°C. Materiál snáší opakované rozmrazování.

Složení 

• Dodává se 2x koncentrovaný: 20 mM Tris-HCl, pH 8,8 (25°C), 100mM KCl, 0,2% Triton X-100, 3 mM MgCl₂, 400 µM dATP, 400 µM dCTP, 400 µM dGTP, 400 µM dTTP, Taq DNA polymeráza (50 U/ml), monoklonální protilátka anti-Taq, SYBR Green I, qPCR Visible Blue Mark, stabilizátory a aditiva.

Kontrola kvality  

• Každá šarže qPCR 2x SYBR Master Mixu_BLUE je testována na amplifikaci genu o jedné kopii v genomové DNA.