Taq DNA polymeráza 1.1
Tento produkt je modifikací Taq DNA polymerázy Unis (katalogové číslo T037-T039). Rozdílem je nižší koncentrace polymerázy (1 U/µl), což umožňuje přesnější dávkování enzymu. Produkt je dále dodáván s 10x koncentrovaným reakčním pufrem nazvaným „PCR Blue Buffer“. Tento pufr obsahuje síran amonný, který umožňuje optimální průběh PCR v širším rozmezí koncentrací hořčíku než klasický 10x reakční pufr a navíc snižuje tvorbu nespecifických DNA fragmentů.
| Kat. č. | Název | Balení | Cena | |
|---|---|---|---|---|
| T112 | Taq DNA polymeráza 1.1 | 500 U | 1 639,00 Kč | |
| T113 | Taq DNA polymeráza 1.1 | 5x 500 U | 6 556,00 Kč | |
| T114 | Taq DNA polymeráza 1.1 | 10x 500 U | 11 473,00 Kč |
Popis produktu
Tento produkt je modifikací Taq DNA polymerázy Unis (katalogové číslo T037-T039). Rozdílem je nižší koncentrace polymerázy (1 U/µl), což umožňuje přesnější dávkování enzymu. Produkt je dále dodáván s 10x koncentrovaným reakčním pufrem nazvaným „PCR Blue Buffer“. Tento pufr obsahuje síran amonný, který umožňuje optimální průběh PCR v širším rozmezí koncentrací hořčíku než klasický 10x reakční pufr a navíc snižuje tvorbu nespecifických DNA fragmentů.
Taq DNA polymeráza
- Taq DNA polymeráza je termostabilní enzym pocházející z bakterie Thermus aquaticus. Tento enzym katalyzuje syntézu komplementárního řetězce DNA ve směru 5´→3´ a také vykazuje exonukleázovou aktivitu ve směru 5´→3´. Při amplifikaci DNA fragmentů Taq polymeráza často přidává na 3´ konec přesahující adenosin, který lze využít pro tzv. TA klonaci PCR produktů. Tato polymeráza však nemá exonukleázovou aktivitu ve směru 3´→5´ a v důsledku toho není schopna opravovat chyby vzniklé při amplifikaci. Výhodou tohoto enzymu je jeho vysoká aktivita (amplifikace 1000 párů bází (bp) trvá < 1 minutu); nevýhodou je výskyt chyb při replikaci (přibližně 1 chyba na 105 až 106 syntetizovaných párů bází). Hlavní využití Taq DNA polymerázy je v diagnostické analýze přítomnosti specifických fragmentů DNA pomocí PCR až do velikosti kolem 5000 bp.
Technické údaje
Komponenty základního balení balení
-
Taq DNA polymeráza 1.1 je dodávána v koncentraci 1 U/µl. V základním balení jsou: 1 zkumavka po 500 U/500 µl (T112), 5 zkumavek po 500 U/500 µl (T113) nebo 10 zkumavek po 500 U/500 µl (T114).
-
Ke každé zkumavce s Taq DNA polymerázou 1.1 je přidána 1 zkumavka s 10x PCR Blue Buffer (1,5 ml). Rovněž je možné objednat 10x Blue Buffer bez MgCl2, ke kterému je dodáván 25 mM MgCl2 v samostatné zkumace (T059).
Skladování
-
Skladovat při teplotě -20°C ± 5°C. Krátkodobě (dny) lze skladovat/přepravovat při teplotě až do 30oC.
Složení
-
Skladovací pufr pro Taq DNA polymerázu 1.1: 20 mM Tris-HCl, pH 8,0 (25°C), 100 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,5% Nonidet P-40, 0,5% Tween 20, 50% glycerol.
-
10x PCR Blue Buffer: 750 mM Tris-HCl, pH 8,8 (25°C), 200 mM (NH4)2SO4, 1% Tween 20, 25 mM MgCl2.
Aktivita
-
Jedna jednotka aktivity (U) je definována jako množství enzymu, které katalyzuje zabudování 10 nmol dNTP během 30 min při 72°C do materiálu precipitovatelného trichloroctovou kyselinou. Reakce probíhá v objemu 50 µl v pufru obsahujícím 10 mM Tris-HCl (pH 8,8 při 25°C), 50 mM KCl, 0,1% Triton X-100, 1,5 mM MgCl2, 200 µM dATP, dCTP, dGTP a [α-32P]dTTP, 50 µg/ml denaturované DNA, 0,5 µM primer a 0,2 - 0,5 U enzymu.
Kontrola kvality
-
Čistota Taq DNA polymerázy 1.1 je ověřována metodou SDS-PAGE. Enzym migruje jako jediný proužek o molekulové hmotnosti 94 kD. Preparát neobsahuje nukleázy.
- Každá výrobní šarže Taq DNA polymerázy 1.1 je testována na schopnost amplifikovat fragment genu savčí genomové DNA pomocí PCR. Výsledný produkt je analyzován elektroforézou na agarosovém gelu v přítomnosti ethidium bromidu; pouze očekávaný fragment DNA je produkován.