Combi PPP Master Mix

Popis produktu

Combi PPP Master Mix obsahuje Taq DNA polymerázu a další komponenty nezbytné pro úspěšný průběh PCR reakce ve dvojnásobné koncentraci. Stačí tedy pouze doplnit primery, templátovou DNA a vodu a vzorek je připraven k PCR. Další obsažená aditiva a barvivo umožňují posléze okamžité nanesení vzorku na gel bez nutnosti přidávat vkládací pufr.

Oproti PPP Master Mixu (kat. č. P124-P126) navíc obsahuje protilátku, která blokuje aktivitu DNA polymerázy. Protilátka se degraduje až při prvním denaturačním kroku PCR. Tato tzv. hot start PCR je zvláště vhodná všude tam, kde dochází k nežádoucí amplifikaci nespecifických fragmentů DNA, k nízké amplifikaci DNA fragmentů, popřípadě k tvorbě artefaktů vznikajících amplifikací kombinovaných primerů.

Hot Start

• Kit obsahuje monoklonální protilátku, která se váže na Taq DNA polymerázu, tím blokuje její enzymatickou aktivitu a zamezuje amplifikaci nespecifických DNA fragmentů. Protilátka je teplotně inaktivována při prvním denaturačním cyklu PCR.

Rychlá příprava (2x koncentrovaný)

• Kit obsahuje 2x koncentrované komponenty nezbytné pro průběh PCR reakce. To umožňuje rychlou přípravu reakční směsi bez nutnosti rozmrazování jednotlivých komponent. Stačí dodat primery, templátovou DNA a doplnit H₂O (součást balení).

Okamžité nanášení na gel

• K amplifikovaným vzorkům není potřeba přidávat vkládací pufr. Kit obsahuje barvivo a aditiva, která umožňují nanesení vzorku na gel a elektroforézu ihned po ukončení PCR reakce.

• Barvivo migruje v čele gelu a neinterferuje tak s kvantifikovatelností PCR produktů. Barvivo ani aditiva nemají vliv na průběh amplifikace.

Vysoká účinnost  a citlivost

• Kit umožňuje velmi citlivou a specifickou amplifikaci požadovaných PCR fragmentů z genomické DNA nebo z komplementární cDNA získané metodou reverzní transkripce; obsahuje MgCl₂ v koncentraci vhodné pro většinu PCR reakcí. 

• Přidaná monoklonální protilátka výrazně snižuje tvorbu nespecifických produktů.

Obr. Monoklonální protilátky anti-Taq přítomná v Combi PPP Master Mixu výrazně snižuje amplifikaci nespecifických produktů. 
Z myších buněk obsahující dvě (+/+), jednu (+/-) nebo žádnou (-/-) alelu studovaného genu byla izolována mRNA (pomocí RNA Blue), převedena na cDNA (pomocí M-MLV reverzní transkriptázy) a přítomnost studované cDNA (950 bp) byla ověřena  pomocí PCR s použitím Combi PPP Master mixu nebo s použitím PPP Master Mixu s kontrolní protilátkou.

Technické údaje

Komponenty základního balení

• 1 zkumavka s 0,5 ml Combi PPP Master Mixu (na 40 reakcí v celkovém objemu 25 µl).

• 1 zkumavka s 1,5 ml PCR H₂O.

Složení

• Combi PPP Master Mix se dodává 2x koncentrovaný: 150 mM Tris-HCl, pH 8,8 (25^oC), 40 mM (NH₄)₂SO₄, 0,02% Tween 20, 5 mM MgCl₂, 400 µM dATP, 400 µM dCTP, 400 µM dGTP, 400 µM dTTP, 100 U/ml Taq DNA polymerázy, monoklonální protilátka anti-Taq (38 nM), barvivo, stabilizátory a aditiva.

Skladování

• Skladovat při teplotě -20°C ± 5°C. Materiál snáší opakované rozmrazování.

Kontrola kvality

• Čistota Taq DNA polymerázy je ověřena metodou SDS PAGE, kdy enzym migruje jako jediný proužek o molekulové hmotnosti 94 kD. Preparát neobsahuje nukleázy.

• Každá šarže Combi PPP Master Mixu je testována na amplifikaci genu o jedné kopii v genomové DNA.