DNáza I, bez Rnáz

Popis produktu

Řada metod molekulární biologie vyžaduje štěpení DNA pomocí deoxyribonukleázy I (DNáza I). Tento enzym štěpí jednovláknové a dvouvláknové řetězce DNA za vzniku mono- a oligonukleotidů. DNáza I v přítomnosti Mg²⁺ hydrolyzuje každý z řetězců dvouvláknové DNA nezávisle a náhodně. Jako příklad použití lze uvést odstranění stopových množství DNA z preparátů RNA (procedury RT-PCR a tzv. Differential Display Library), DNázový "footprinting", mapování oblastí citlivých k DNáze, konstrukce plasmidů, radioaktivní značení pomocí nick translace. Běžně dodávané komerční preparáty DNázy, i ty u kterých je vyznačeno, že neobsahují RNázovou aktivitu, jsou pro tyto experimenty nepoužitelné, neboť stopová množství RNázy se negativně projeví při jejich aplikaci.

Preparát DNáza I, bez RNáz  byl připraven z bovinního pankreatu tak, že neobsahuje ani stopová množství RNázy a lze jej bezprostředně využít pro molekulárně-biologické techniky.

Technické údaje

Koncentrace

• DNáza I, bez RNáz je dodávána v koncentraci 10 000 U/ml.

Balení

• 1 zkumavka DNázy I, bez RNáz, 5 000 U/0,5 ml.
• 1 zkumavka 5x koncentrovaného reakčního pufru, 1 ml.

Definice jednotky

• Jedna jednotka je definována jako množství enzymu, které kompletně degraduje 1 µg DNA za 10 min při 37^oC ve 20 µl reakčního pufru o složení: 20 mM Tris-HCl, pH 7.6, 20 mM NaCl, 12 mM MgCl₂ a 4 mM CaCl₂.

Skladování

• Skladovat při teplotě -20 ± 5^oC. Materiál snáší opakované rozmrazování.

Složení

• Reakční pufr (5x): 100 mM Tris-HCl (pH 7.6 při 20^oC), 100 mM NaCl, 60 mM MgCl₂, 20 mM CaCl₂ (označen 5x DNáza I react pufr).
• Skladovací pufr: 10 mM Tris-HCl (pH 7,6 při 20^oC), 10 mM NaCl, 6 mM MgCl₂, 2 mM CaCl₂, 50% (vol/vol) glycerol.

Kontrola kvality

• Za podmínek kdy Dnáza I kompletně degraduje DNA, nemá tento enzym efekt na průběh RT-PCR a na elektroforetickou intaktnost RNA.