qPCR 2x Blue Master Mix_BLUE

Popis produktu

Tento produkt je qPCR 2x Blue Master Mix, obohacený o barvivo qPCR Visible Blue Mark Top-Bio prevenience (kat. č. B129). Přítomnost barviva neovlivňuje průběh PCR, ale usnadňuje vizualizaci přítomnosti Master mixů ve více-jamkových destíčkách. Hlavní využití tohoto produktu je v qPCR s detekčními sondami typu TaqMan, Molecular beacons, FRET a další.

Rychlá příprava (2x koncentrovaný)

• Produkt obsahuje všechny konstantní komponenty pro průběh qPCR 2x koncentrované (optimalizovaný reakční pufr, nukleotidy, Taq DNA polymerázu a protilátku anti-Taq). To umožňuje rychlou přípravu reakční směsi bez nutnosti rozmrazování a přesného dávkování jednotlivých komponent. Stačí dodat primery, templátovou DNA, DNA sondu a eventuálně doplnit H₂O (součást balení).

Hot Start

• Produkt obsahuje monoklonální protilátku anti-Taq, která se váže na DNA polymerázu a tím blokuje její enzymatickou aktivitu a zamezuje amplifikaci nespecifických DNA fragmentů. Protilátka je teplotně inaktivována při prvním denaturačním cyklu PCR.

Cílová detekce

• Tento produkt je optimalizován pro citlivou a přesnou detekci DNA fragmentů amplifikovaných při qPCR z genomové DNA nebo cDNA získané metodou reverzní transkripce.

 Obr. 1. qPCR Visible Blue Mark usnadňuje pipetování do multi-jamkových destiček. Do jamek 384-jamkové destičky byly vpraveny 10 µl alikvoty qPCR 2x  Blue Master Mix (sloupce 3-8) nebo 10 µl alikvoty qPCR 2x Blue Master Mix_BLUE, obsahující 100x ředěný qPCR Visible Blue Mark (sloupce 1, 2, 9-14, 23, 24). We sloupci 16-22 byl qPCR 2x Blue Master Mix_BLUE napipetován jen do řádek A, C, E, G, I, K, M a O. Ve sloupci 15 zůstaly všechny jamky prázdné.

 Obr. 2. qPCR Visible Blue Mark neovlivňuje účinnost qPCR. qPCR 2x Blue Master Mix (Top-Bio, kat. č. P521) byl doplněn (modré křivky) nebo ne (zelené křivky) o qPCR Visible Blue Mark (konečné ředění 1:200), SYBR Green 1, DNA templát v pěti desetinásobných ředěních a odpovídající primery. Do testu byla také zahrnuta kontrola bez DNA templátu (NTC). Vzorky ve trojicích byly analyzovány pomocí cykleru pro real-time PCR.

Technické údaje

Komponenty základního balení

• 1 zkumavka s 0,5 ml qPCR 2x Blue Master Mix_BLUE (množství je dostačující např. na 40 reakcí po 25 µl).
• 1 zkumavka s 1,5 ml PCR Ultra H₂O.

Skladování

• Skladovat při teplotě -20°C ± 5°C. Materiál snáší opakované rozmrazování.

Složení

• Dodává se 2x koncentrovaný: 150 mM Tris-HCl, pH 8,8 (25°C), 40 mM (NH₄)₂SO₄, 0,02% Tween 20, 5 mM MgCl₂, 400 µM dATP, 400 µM dCTP, 400 µM dGTP, 400 µM dTTP, Taq DNA polymerázy (50 U/ml), monoklonální protilátka anti-Taq, barvivo qPCR Visible Blue Mark, stabilizátory a aditiva.

Kontrola kvality

• Každá šarže qPCR 2x Blue Master Mixu_BLUE je testována na amplifikaci genu o jedné kopii v genomové DNA.